transwell細胞遷移實驗 血清(transwell細胞遷移實驗)

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您好,現在漢漢來為大家解答以上的問題。transwell細胞遷移實驗 血清,transwell細胞遷移實驗相信很多小伙伴還不知道,現在讓我們一起來看看吧!

1、Transwell法的步驟:先把小室擦干凈后在超凈工作臺照紫外過夜。

2、如新的小室省略此步。

3、下一步將小室倒扣并小室的底部外側滴加0.1%(還是1%記不清了)的明膠室溫放置20-30分鐘。

4、這是將細胞消化下來,調濃度。

5、拿出24孔板加600ml的含有刺激因子的培養基。

6、小室上還未干的明膠甩掉,加細胞放入24孔板里。

7、放入細胞培養箱培養4-6小室。

8、拿出小室甩掉里邊的培養基。

9、小心擦盡小室里邊的細胞(不能碰外邊)。

10、將小室放入裝有600ml結晶紫的24孔板染色1小時。

11、移到空的24孔板后即可在顯微鏡下觀察了。

12、細胞遷移實驗步驟(Neuroprobe的使用方法) 1.膜預處理將48.5ml H2O +1.5ml 醋酸+150μL 鼠尾膠原置于50ml的離心管。

13、在膜的粗糙面用鉛筆做標記,放入上述溶液中4度過夜。

14、實驗前將膜取出,放入裝有PBS的培養皿中漂洗一遍,再用饑餓培養基洗一遍,吸去培養基后加入新的饑餓培養基,放入37度培養箱中。

15、2. 處理細胞將細胞消化,調濃度1×105個/ml,細胞遷移裝置下層加入166μl含有刺激因子的饑餓培養基。

16、小心鋪好膜(粗面朝下),裝好塑料墊,固定上層裝置。

17、上層加入100μl細胞懸液,遷移4-6h。

18、3. 固定小心將膜取下來,在用PBS弄濕的濾紙上掛掉光滑面的細胞,在新的濾紙上粗面朝上放置,徹底晾干。

19、然后再甲醇里粗面朝上固定5min,徹底晾干。

20、4. 染色粗面朝下置于結晶紫染液中30min,取出膜用雙蒸水漂洗一遍,粗面朝上放在載玻片上,數細胞。

21、這個方法比transwell方便。

22、與boyden chemper法類似。

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