您好,肖大哥就為大家解答關于重組質粒的構建步驟圖，重組質粒的構建步驟相信很多小伙伴還不知道,現在讓我們一起來看看吧！

1、重組質粒構建是常用的分子生物學手段，其實只是最基本的方法，一般一個星期同時構建三二個組質粒是沒有問題的。

2、在國內先進的實驗中，也大都是由實驗員搞定。

3、但是其中還是有些基本的技巧需要掌握。

4、在這里將我的心得分享于大家，這也是我本人幾年來一線工作時的經驗積累，以期能為谷友提供借鑒，讓大家在實驗中少走彎路。

5、所涉及內容如下： 1) 克隆基因的酶切位點問題 2) 載體酶切的問題 3) 連接片段濃度比的問題 在闡明上述問題同時，本人盡可能舉些實驗中的問題案例予以說明。

6、 一、克隆基因的酶切位點問題 克隆位點選擇的問題。

7、首先要對目標基因進行酶切位點掃描分析，列出其所含酶切位點清單。

8、然后對照質粒多克隆位點，所選擇的克隆位點必須是目標基因所不含的酶切位點。

9、這是常識，不贅述。

10、 2、保護堿基數目的問題。

11、在設計PCR引物時，引入酶切位點后，常常要加入保護堿基，這是大家所熟知的。

12、但是保護堿基數量多少，可能被新手所忽視。

13、這種忽視碰可能會大大影響后續的實驗進展。

14、 一般情況下，普通的內切酶只加入兩個保護堿基，其內切反應就可以正常進行；而有一類，僅僅只加入兩個保護堿基，其內切反應就不能正常進行，這是因為內切酶不能正常結合DN段上。

15、如NdeI就屬這類，需要加入至少6個保護堿基，常用的HindIII也要三個。

本文就講到這里，希望大家會喜歡。