您好,肖大哥就為大家解答關于引物的設計原則包括，引物的設計原則相信很多小伙伴還不知道,現在讓我們一起來看看吧！

1、引物設計原則長度：15—30bp，其有效長度[Ln=2(G十C)十(A十T)]一般不大于38，否則PCR的最適延伸溫度會超過Taq酶的最佳作用溫度(74度)，從而降低產物的特異性。

2、2、G十C含量：應在40%一60%之間，PCR擴增中的復性溫度一般是較低Tm值引物的Tm值減去5—10度。

3、引物長度小于20時，其Tm恒等于4×(G十C)十2×(A十T)。

4、3、堿基分布的隨機性：應避免連續出現4個以上的單一堿基。

5、尤其是不應在其3’端出現超過3個的連續G或C，否則會使引物在G十C富集序列區錯誤引發。

6、4、引物自身：不能含有自身互補序列，否則會形成發夾樣二級結構。

7、5、引物之間：兩個引物之間不應有多于4個的互補或同源堿基，不然會形成引物二聚體，尤應避免3’端的互補重疊。

8、6、上下游引物的互補性：一個引物的3‘末端序列不允許結合到另一個引物的任何位點上。

9、7、3’末端：如果可能的話，每個引物的3‘末端堿基應為G或C。

10、8、引物應當超出限制性內切酶識別位點至少3個核苷酸。

11、擴展資料引物合成是將預先連接在固相載體上的活性基團被保護的核苷酸與三氯乙酸反應，脫去其5′-羥基的保護基團DMT，獲得游離的5′-羥基。

12、2、合成DNA的原料，亞磷酰胺保護核苷酸單體，與活化劑四氮唑混合，得到核苷亞磷酸活化中間體，它的3′端被活化，5′-羥基仍然被DMT保護，與溶液中游離的5′-羥基發生縮合反應。

13、3、帶帽(capping)反應，縮合反應中可能有極少數5′-羥基沒有參加反應(少于2%)，用乙酸酐和1-甲基咪唑終止其后繼續發生反應，這種短片段可以在后續環節根據實驗需要來選擇純化方式分離掉。

14、4、在氧化劑碘的作用下，亞磷酰形式轉變為更穩定的磷酸三酯。

15、參考資料來源：百度百科—引物設計。

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