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1.吸附柱色譜

吸附原理：在一定條件下，硅膠與待分離的物質發生反應，主要是物理和化學作用。物理作用來自硅膠表面和溶質分子之間的范德華力。化學作用主要是硅膠表面的硅羥基與待分離物質之間的氫鍵作用。

色譜管是具有均勻內徑和收縮下端的硬玻璃管。下端用棉花或玻璃纖維塞住，管內裝有吸附劑。吸附劑的顆粒應盡可能保持均勻，以確保良好的分離效果。除非另有說明，通常使用直徑為0.07~0.15mm的顆粒。色譜柱的尺寸、吸附劑的類型和劑量以及洗脫過程中的流速都在每種類型下進行了規定。

2.分配柱色譜法

該方法與吸附柱色譜法基本一致。裝柱前，將載體與固定液混合，然后分幾次移入色譜柱，用帶平面的玻璃棒壓緊；可以將樣品溶解在固定液中，與少量載體混合，并添加到預制色譜柱的頂部。洗脫液應與固定液混合使其飽和，以避免洗脫過程中兩相分布的變化。

擴展信息：

色譜柱的尺寸和規格取決于待分離樣品的數量和吸附的難易程度。一般柱管直徑為0.5 ~ 10 cm，長度為直徑的10 ~ 40倍。吸附劑的裝填量約為樣品重量的20 ~ 50倍，柱高應占柱管高度的3/4。柱子太細或太粗太短都不好。

裝載前，立柱應清潔干燥，并垂直固定在鐵架上。將少量洗脫液注入柱中，取一小球玻璃棉或脫脂棉，用溶劑潤濕，塞入管中。用長玻璃棒輕輕送至底部，適當搗實，驅除棉球內的氣泡，但不要壓得太緊，以免阻礙溶劑的順利流動(如果管內有篩板，可省略此步驟)。然后在上面加一層約0.5厘米厚的干凈細沙，從對稱方向輕輕敲擊柱管，使沙面平整。

常用的柱加載方法有干加載法和濕加載法。

1.干裝法：將2/3的溶劑裝入柱中，在噴嘴上放一個漏斗，打開活塞，讓溶劑慢慢滴入錐形瓶中，然后將干燥的吸附劑通過漏斗以細流的形式倒入柱中，同時用玻璃棒(或鉛筆等)上的橡皮塞輕輕敲擊柱子。)使吸附劑均勻沉降到底部。

填充后，用滴管吸取少量溶劑，將附著在管壁上的吸附劑顆粒沖入柱內，繼續敲擊管道，直至柱不再下沉。在圓筒上覆蓋一層薄薄的干凈細沙，將圓筒上的液層高度降低到0.1 ~ 1厘米，然后將收集的溶劑反復循環通過圓筒幾次，以獲得沉降比較緊密的圓筒。

2.濕式上樣法：這種方法與干式上樣法相似，但不同的是吸附劑需要在上柱前預先用溶劑配制成漿液，漿液要盡可能連續、均勻地倒入。如果色譜柱較大，應事先將吸附劑浸泡在一定量的溶劑中，充分攪拌過夜(除泡)，然后裝柱。

無論是干裝填法還是濕裝填法，裝填后的色譜柱應裝填均勻，松緊適宜，稠度適宜，無氣泡和裂紋；否則會造成洗脫液不規則流動，形成“溝流”，造成色譜帶變形，影響分離效果。

來源：搜狗百科-柱層析

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